Avaliação microscópica de superfícies de aço inoxidável usados em ensaios de biofilmes / Microscopic evaluation on stainless steel surfaces used in biofilm assays

Superfícies de aço inoxidável com especificações determinadas pela American Society for Testing and Materials (ASTM) são usadas em testes in vitro para simular a formação e a remoção de biofilmes. Muitas vezes estas superfícies são reutilizadas nos ensaios de formação de biofilmes. O objetivo deste trabalho foi avaliar se cupons de aço inoxidável anteriormente utilizados para formação de biofilmes multiespécies podem ser reutilizados em novos ensaios. Assim, cupons submetidos a diferentes procedimentos de higienização foram analisados por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e perfilometria . A reutilização das superfícies em novos experimentos deve ser realizada com cautela, aplicando procedimentos que removam as células bacterianas e a substância polimérica extracelular (EPS) aderidas na superfície. Além disso, observações da superfície (topografia e rugosidade) devem ser avaliadas, comprovando as especificações da ASTM.

Bacillus cereus e Geobacillus stearothermophilus em leite ultra alta temperatura (UAT) / Bacillus cereus and Geobacillus steartothermophilusin ultra high temperature (UHT) milk

O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de B. cereus e G. stearothermophilus em 100 amostras de leite UAT (integral e desnatado). O isolamento dos esporos e das células vegetativas seguiu metodologias oficiais, com pequenas modificações. B. cereus foi isolada de 7% amostras de leite UHT, de 6 diferentes marcas. As contagens máximas de células vegetativas e esporos de B. cer eus foram de 3,54 Log UFC/mL e 3,93 Log esporos/mL, respectivamente. A presença dos genes codificadores de enterotoxina não hemolítica (NHE) foi observada em 33% dos isolados e da hemolisina (HBL ) em 100% dos isolados. O gene hblA foi encontrado em 91,6 % dos isolados, porém nenhum isolado apresentou os 3 genes do complexo HBL. G. stearothermophilus foi identificada em 22,8% (34/149) dos isolados de esporo altamente resistente ao calor (HRRS), representando 18% das amostras de leite UAT e as contagens de esporos variaram de < 1Log a 3,40 Log esporos/mL.

Caracterização fenotípica e genotípica de Enterococcus spp. isolados de ambiente de processamento de queijo Minas Frescal / Phenotypic and genotypic characterization of Enterococcus spp. isolated from Minas Frescal cheese processing line

O objetivo deste trabalho foi identificar as fontes de contaminação de Enterococcus spp. em uma linha de processamento de queijo Minas Frescal e caracterizar estes micro-organismos quanto à capacidade proteolítica e lipolítica bem como quanto as características de patogenicidade. A partir dos resultados, pode-se verificar que os Enterococcus spp. estavam presentes em amostras de matéria-prima, ambiente e produto final, com destaque para o equipamento de ordenha que apresentou a maior contagem de Enterococcus spp. (5 log UFC/cm2) e a maçaneta que apresentou contaminação persistente ao longo das coletas. Aproximadamente 47% dos isolados apresentaram atividade proteolítica e lipolítica. Além disso, os isolados testados apresentaram resistência múltipla a antibióticos e possuíram múltiplos genes de virulência.

Modelagem da formação de biofilmes de Pseudomonas fluorescens e Pseudomonas aeruginosa em aço inoxidável através da metodologia de superfície de resposta / Modeling Pseudomonas luorescens and Pseudomonas aeruginosa biofilm formation on stainless steel by response surface methodology

O objetivo deste trabalho foi verificar a influência do tempo e da temperatura na formação de biofilmes de P. fluorescens e P. aeruginosa em superfície de aço inoxidável através de um delineamento composto central rotacional (DCCR). Os biofilmes foram avaliados nas temperaturas de 7; 13; 27; 41 e 47 °C e nos tempos de contato de 0; 1,2; 4; 6,8 e 8 dias. As superfícies de resposta mostraram que P. fluorescens foi capaz de formar biofilme entre 0,9 e 8 dias em temperaturas entre 9,8 e 47 °C. P. aeruginosa foi capaz de formar biofilme entre0,7 a 8 dias e entre 11 e 47 °C. É importante destacar que estas condições são frequentemente encontradas durante todo o processamento de queijo Minas frescal, comprometendo a segurança do alimento.

Quorum sensing in Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis and Bacillus cereus strains isolated from ricotta processing / Quorum sensing em cepas de Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis e Bacillus cereus isoladas do processamento de ricota

ABSTRACT: The quorum sensing phenomenon is a process of intra- and inter-species microbial communication involving the production and detection of extracellular signaling molecules. The autoinducer AI-2 has been proposed to serve as a 'universal signal' for interspecies communication. This study aimed to evaluate the capability of Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, and Bacillus cereus strains isolated from ricotta processing to produce quorum sensing signalling molecules (AI-2). The strains were evaluated for the presence of the luxS gene using the polymerase chain reaction. AI-2 quorum sensing signalling molecules were measured in relative light units (RLUs) using a luminometer. A total of 74% of E. faecium, 91% of E. faecalis, and 95% of B. cereus isolates were positive for luxS gene. In addition, the induced bioluminescence in Vibrio harveyi BB170 was observed in all strains, indicating the presence of the AI-2 autoinducer.

RESUMO: O fenômeno quorum sensing corresponde a um processo de comunicação intra e interespécies microbianas e é mediado por sinais químicos extracelulares, denominados moléculas sinalizadoras ou auto indutoras (AI). A molécula AI2 está envolvida na comunicação interespécies, denominada sistema "universal" de comunicação. Este estudo teve como objetivo avaliar a capacidade de Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis e Bacillus cereus isolados do processamento de ricota em produzir moléculas sinalizadoras de Quorum sensing (AI-2). Os isolados foram avaliados quanto à presença do gene luxS utilizando a reação em cadeia da polimerase (PCR). As moléculas sinalizadoras (AI-2) foram medidas em unidades relativas de luz (RLU) através de um luminômetro. Um total de 74% dos isolados de E. faecium, 91% de E. faecalis e 95% de B. cereus foram positivos para o gene luxS. Além disso, todos os isolados apresentaram capacidade de induzir o fenômeno de bioluminescência em Vibrio harveyi BB170, indicando a presença de auto indutores AI-2.

Growth of enterotoxin producing Bacillus cereus in meat substrate at 10 ºC and 30 ºC

The behaviour of enterotoxin-producing Bacillus cereus in meat was investigated by inoculating spore suspensions of five cultures into meat substrate (pH 5.8) and incubating at 10ºC and 30ºC. The bacterial populations were evaluated after different times by plate counts in nutrient agar. All the cultures presented growth at 30ºC with the generation time varying from 28.8 to 36.0 minutes. Three cultures also presented growth at 10ºC with generation times between 10.16 and 28.38 h. Considering the results, it was concluded that meat kept at abusive temperatures would be subject to development of this microorganism.

Qualidade microbiológica de ricotas comerciais e os riscos associados à presença de Listeria monocytogenes / Microbiological quality of marketed ricotta cheese and disease risks associated with Listeria monocytogenes contamination

No presente estudo foi avaliada a qualidade microbiológica de ricotas comercializadas na região de Campinas-SP e caracterizado o potencial patogênico das cepas isoladas de Listeria monocytogenes. Um total de 45 amostras de ricota foi submetido às análises de contagens de coliformes termotolerantes, estafilococos coagulase positiva, bolores, leveduras e detecção de Salmonella sp. e Listeria monocytogenes. Os resultados apontaram que 46,7 por cento (21/45) das ricotas estavam em desacordo com os padrões microbiológicos para alimentos estabelecidos pela Diretoria Colegiada da Agência Nacional de Vigilância Sanitária – Resolução RDC 12/2001. O número de amostras que apresentaram contagens acima das permitidas pela legislação em relação aos coliformes termotolerantes foi de 46,7 por cento e em relação a estafilococos coagulase positiva foi de 2,2 por cento, além de 6,7 por cento das amostras apresentaram Listeria monocytogenes. Não foi isolada Salmonella das amostras analisadas. Destaca-se a presença de L. monocytogenes em 6,7 por cento (3/45) das amostras com perfilgenético actA tipo 4 e hly tipo 1 e pertencente à linhagem I, potencialmente patogênico ao homem. Este estudo indica que o produto analisado merece maior atenção por parte da comunidade científica, bem como pelo setor produtivo e órgãos de vigilância sanitária com o intuito de empreender a melhoria da qualidade e consequente, segurança ao consumidor.

Avaliação microbiológica do preparo de fórmula láctea infantil em lactário hospitalar / Microbiological quality in preparing the infant milk formula in hospital milk dispensary

As condições higiênico-sanitárias no preparo de fórmulas infantis em lactário hospitalar foram investigadas por meio de análises microbiológicas de amostras do ar ambiental, das superfícies de equipamento e utensílios e da fórmula láctea infantil (FLI) em pó e reconstituída. As coletas foram realizadas em dez pontos amostrais de seis lotes de preparação, um total de 60 amostras, nas quais foram realizadas as determinações de microorganismos indicadores dos grupos dos coliformes totais e fecais, enterobactérias totais, micro-organismos aeróbios mesófilos e psicrotróficos totais e dos micro-organismos patogênicos Staplylococcus coagulase positiva, Bacillus cereus e Salmonella. Uma grande variação nas contagens dos micro-organismos indicadores foi observada, embora nenhum dos micro-organismos patogênicos analisados tenham sido detectados.Todas as amostras da FLI em pó apresentaram-se adequadas para o consumo, de acordo com a resolução vigente, porém as amostras das FLIs reconstituídas apresentaram contagens elevadas para a maioria microorganismos indicadores. O liquidificador foi identificado como a principal fonte de contaminação das FLIs reconstituídas, apresentando contagens elevadas de micro-organismos indicadores. A não conformidade aos pré-requisitos higiênico-sanitários durante o preparo da FLI reconstituída para lactentes, resulta em um produto microbiologicamente inadequado para crianças em estado de saúde debilitado.

The hygienic conditions in preparing the infant milk formula used in a public hospital milk dispensarywere investigated by microbiological analyses of air, equipment, utensils, powdered and reconstituted infantdairy formula (IDF). Samples were collected from 10 different sampling points of six preparation batches.A total of 60 samples were analyzed for identifying and quantifying the indicative microorganisms as fecalcoliforms, total Enterobacteriaceae, aerobic mesophilic and psycrotrophic microorganisms and pathogenicmicroorganisms as coagulase-positive Staplylococcus, Bacillus cereus and Salmonella. A high variation in theindicative microorganisms counting was observed, although no pathogenic agent was detected. All of thepowdered IDF samples were appropriate for consumption according to the regulatory standard. However,the reconstituted IDF samples showed high counts of the majority of indicative microorganisms. Also,this study identified the blender as the main source for reconstituted IDF contamination, and from whichthe total Enterobacteriaceae and total aerobic mesophilic microorganisms were isolated. Non-compliancewith the hygienic prerequisites during the preparation of the reconstituted IDF resulted in an inadequatel product for children consumption.

Determination and characterization of pathogens found in dairy products

The quality of dairy products was investigated on 63 samples, being 24 non industrial-type ice creams, 19 pasteurized milk creams and 20 of cheese pâtés. The samples were analyzed for searching thermo-tolerant coliforms, coagulase positive Staphylococcus, Salmonella spp., molds and yeasts, Bacillus cereus and Listeria monocytogenes. Additionally, characterization of the enterotoxigenic potential of B. cereus for the codified genes of enterotoxins NHE and HBL was also carried out by PCR technique; also the molecular subtypingof L. monocytogenes allelic polymorphism of virulence genes actA and hly was performed. Thirty-three percent (8/24) of ice cream samples and 15.8% (3/19) of milk cream samples did not comply with the microbiological standards established by RDC Nº12/2001 of ANVISA, because these products showed thermo-tolerant coliform counts above the established limits. L. monocytogenes was detected in one milk cream sample and those bacteria isolates were identified as belonging to the lineage I, which is potentially pathogenic to human. Potentially enterotoxigenic B. cereus was isolated from the three kinds of products analyzed in the present study. The degree of microbiological contamination found in this study reflects the inadequate hygienic-sanitary conditions in processing the dairy products, indicating the necessity of abest action, surveillance and control by sanitary authorities.

Comparaçäo de dois meios seletivos no isolamento de Listeria sp, a partir de alguns produtos lácteos e cárneos / comparison of two plating media for the isolation of listeria sp from some brazilian dairy and meat products

Resumo: Este trabalho tem por objetivo avaliar o desempenho de dois meios seletivos para o isolamento de listeria e L.monocytogenes.Utilizou-se a metodologia recomendada pelo United States Department of Agriculture-Food Safety and Inspection service(USDA-FSIS) que preconiza para o isolamento o ágar vogeljohnson modificado-MJV.um total de 140 amostras de produtos láteos e cárneos(20 por produto), coletadas em Campinas, SP, Brasil, foram analisadas.Os resultados demonstraram a superioridade do ágar MVJ no isolamento de L.monocytogenes e indicam a necessidade do uso de um meio de isolamento a fim de minimizar a ocorrência de resultados falso negativos.